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如何判斷SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)中凝膠制備是否成功?

更新時(shí)間:2025-05-17      點(diǎn)擊次數(shù):89



可以從以下幾個(gè)方面判斷 SDS - PAGE 電泳實(shí)驗(yàn)中凝膠制備是否成功:

外觀檢查

    • 凝膠透明度:成功制備的凝膠應(yīng)具有良好的透明度,質(zhì)地均勻,無(wú)明顯的渾濁、顆?;驐l紋。如果凝膠出現(xiàn)發(fā)白、不透明的情況,可能是由于凝膠未充分聚合、試劑不純或含有雜質(zhì)等原因?qū)е隆?/p>

    • 表面平整度:凝膠表面應(yīng)平整光滑,無(wú)氣泡、凹陷或凸起。若表面不平整,會(huì)影響樣品在凝膠中的遷移路徑,導(dǎo)致條帶變形或不均勻。

    • 邊緣完整性:凝膠邊緣應(yīng)整齊,與電泳槽壁緊密貼合,無(wú)漏膠現(xiàn)象。若邊緣不完整或有漏膠,會(huì)使凝膠在電泳過(guò)程中出現(xiàn)電場(chǎng)不均勻,影響分離效果。

  • 凝膠硬度和彈性:用手指輕輕按壓凝膠表面,成功的凝膠應(yīng)具有一定的硬度和彈性,能夠承受一定的壓力而不破裂或變形。如果凝膠太軟,可能是聚合,需要延長(zhǎng)聚合時(shí)間或檢查引發(fā)劑和加速劑的用量;如果凝膠太硬、易碎,則可能是丙烯酰胺濃度過(guò)高或交聯(lián)劑比例不當(dāng)。

  • 電泳測(cè)試

    • 指示劑遷移:在加入樣品進(jìn)行電泳時(shí),觀察指示劑(如溴酚藍(lán))的遷移情況。如果指示劑能夠均勻、快速地向陽(yáng)極移動(dòng),形成一條清晰的藍(lán)色條帶,說(shuō)明凝膠的導(dǎo)電性和孔徑分布均勻,凝膠制備基本成功。若指示劑出現(xiàn)拖尾、分叉或遷移速度異常,則可能是凝膠存在問(wèn)題。

    • 蛋白條帶分離:對(duì)于已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白樣品,在電泳后應(yīng)能按照其分子量大小在凝膠上呈現(xiàn)出清晰、分離良好的條帶。如果條帶清晰、整齊,沒(méi)有明顯的彌散、扭曲或重疊現(xiàn)象,說(shuō)明凝膠的分辨率較高,能夠有效地分離不同分子量的蛋白質(zhì),凝膠制備較為成功。反之,如果條帶模糊、無(wú)法分辨,可能是凝膠的孔徑不合適、聚合不均勻或樣品處理不當(dāng)?shù)仍蛩隆?/p>



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